Interakce MRP2 transportérů s vybranými antiepileptiky

Abstract

Cíl studie: Na základě současných studií, které odhalily zvýšenou expresi efluxního transportéru MRP2 v hematoencefalické bariéře pacientů rezistentních k léčbě antiepileptiky, byla učiněna hypotéza, že by tato zvýšená exprese MRP2 mohla přispívat k selhávání antiepileptické léčby, k tzv. refrakterní epilepsii. Cílem naší studie bylo testovat substrátovou afinitu vybraných antiepileptik k MRP2 transportéru. Zvlášť jsme se soustředili na fenobarbital, etosuximid, primidon, valproát, karbamazepin, klonazepam a lamotrigin. Dále jsme testovali inhibiční potenciál těchto antiepileptik k MRP2-řízenému transportu. Metody: Ke studiu substrátové afinity testovaných antiepileptik k MRP2 byly provedeny transportní experimenty na epiteliálních buněčných monovrstvách kultivovaných na mikroporózních membránových filtrech. Konkrétně byly pro tento účel použity polarizované MDCKII buňky transfekované cDNA lidského MRP2 a jako kontrolní MDCKII-NeO buněčné linie, kde je vlastní exprese MRP2 utlumena. Pro určení inhibičního potenciálu byly na výše zmíněných buněčných kulturách provedeny akumulační zkoušky za použití známého fluorescenčního substrátu MRP2 kalceinu. Výsledky: Testovaná antiepileptika nejsou ani substátem ani inhibitorem MRP2 transportéru. Závěr: Naše data nepotvrdily hypotézu, že se zvýšená exprese...

(English version) Purpose: Based on recent studies, which have determinated overexpression of efflux transporter MRP2 in blood-brain barier of patients with refractory epilepsy, it has been suggested that this overexpression could contribute to the farmacoresistance to antiepileptic drugs. The aim of our study was to test substrate affinity of selected antiepileptic drugs. In particular, we focused on phenobarbital, phenytoin, ethosuximide, primidone, valproate, carbamazepin, clonazepam and lamotrigin. Furthermore, the inhibitory potency of these antiepileptic to MRP2 was examined. Methods: To study substrate affinity of tested antiepileptic to MRP2, transport experiments were performed in epithelial cell monolayers cultivated on mikroporous membrane filtres. Particulary, MDCKII cells transfected with cDNA of human MRP2 and, as a control, MDCKII-NeO cells where the expression of MRP2 is supressed, were used. For detection of inhibitory potency of the antiepileptic drugs to MRP2, accumulation assays were carried out on MDCKII-MRP2 and MDCKII-NeO cell lines using calcein as a known fluorescent substrate of MRP2. Results: The tested antiepileptic drugs are neither substrates nor inhibitors of MRP2. Conclusion: Our data do not support the hypothesis that the overexpression of MRP2 in blood- brain...