Přehled metodických přístupů vedoucích ke kvalitativnímu a kvantitativnímu hodnocení mikrobiálních biofilmů

Abstract

Charles Univerzity Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Study program: Medical Laboratory Technician Author: Pavlína Holmanová Supervisor: RNDr. Klára Konečná, Ph.D. Title of bachelor thesis: Overview of methodological approaches leading to qualitative and quantitative microbial biofilm evaluation Background: The aim of this work was to compose an overview of methodical approaches leading to qualitative and quantitative evaluation of microbial biofilms. To optimize the methods leading to preparation of mounts with biofilm-forming microorganisms evaluated by epifluorescence or confocal laser scanning microscopy. Methods: Optimization of microbial biofilm staining procedures for subsequent evaluation by epifluorescence microscopy. Formation of microbial biofilms - cultivation of microorganisms in various cultivation media in a microtiter plate, preparation of solutions with fluorescent dyes. Observation of coloured, dispersed biofilms by fluorescence microscope. Results: Using fluorescence microscopy, optimal target concentrations of fluorescent dyes in various combinations were verified. The combination of Syto 9 (SYTO™ 9 Green Fluorescent Nucleic Acid Stain) and propidium iodide was confirmed to be effective for the determination of viability of biofilm-forming microbial cells. The combination of...

Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd Studijní obor: Zdravotní laborant Autor: Pavlína Holmanová Školitel: RNDr. Klára Konečná, Ph.D. Název bakalářské práce: Přehled metodických přístupů vedoucích ke kvalitativnímu a kvantitativnímu hodnocení mikrobiálních biofilmů Cíl práce: Cílem této práce bylo zpracovat přehled metodických přístupů vedoucích ke kvalitativnímu a kvantitativnímu hodnocení mikrobiálních biofilmů. Dále pak provést optimalizaci metodiky vedoucí k přípravě preparátů s biofilm-formujícími mikroorganismy hodnocenými prostřednictvím epifluorescenční, případně konfokální laserové skenovací mikroskopie. Metody: Optimalizace metodiky barvení mikrobiálních biofilmů pro následné hodnocení epifluorescenční mikroskopií. Formování mikrobiálních biofilmů - kultivace mikroorganismů v různých kultivačních mediích v mikrotitrační destičce, příprava roztoků s fluorescenčními barvivy. Pozorování barevných dispergovaných biofilmů fluorescenčním mikroskopem. Výsledky: Pomocí fluorescenční mikroskopie byly ověřeny optimální cílové koncentrace fluorescenčních barviv v různých kombinacích. Pro určení viability mikrobiálních buněk formujících biofilm se osvědčila kombinace barviv Syto 9 (SYTO™ 9 Green Fluorescent Nucleic Acid Stain) a...