Syntéza a hodnotenie zhášačov fluorescencie zo skupiny azaftalocyaninov

Abstract

Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra: Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Kandidát: Michal Kántor Školiteľ: prof. PharmDr. Petr Zimčík, Ph.D. Konzultant: Mgr. Jiří Demuth Názov práce: Syntéza a hodnotenie zhášačov fluorescencie zo skupiny azaftalocyanínov Nesymetrické dialkylamino substituované azaftalocyaníny (AzaPcs) majú unikátne fotofyzikálne vlastnosti - absorpciu svetla medzi 300 a 700nm, skoro nulovú vlastnú fluorescenciu a schopnosť zhášať fluorescenciu ďalších zlúčenín. Tieto vlastnosti robia z AzaPcs vhodných kandidátov na univerzálne ,,dark quenchers", ktoré môžu byť využité v real time PCR. V tejto práci som sa zameral na hodnotenie rozdielov v zhášaní sond značených v rozdielnych pozíciách oligodeoxynukleotidového (ODN) reťazca. Boli pripravené dva zhášače z rôznymi substituentmi vhodnými k väzbe na rozdielne miesta ODN (viď Obr.). Nasledujúc syntézu zhášačov, boli pripravené tri rôzne sondy- jedna so zhášačom v strede ODN (Obr. A), druhá so zhášačom na konci ODN (Obr. B), tretia so zhášačom v strede a na konci ODN (Obr. C). Všetky pripravené sondy boli čistené na systéme HPLC a následne bola zmeraná a porovnaná efektivita zhášania týchto sond.

Charles University, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department: Department of Pharmaceutical Chemistry and Pharmaceutical Analysis Candidate: Michal Kántor Supervisor: prof. PharmDr. Petr Zimčík, Ph.D. Consultant: Mgr. Jiří Demuth Title of thesis: Synthesis and study of azaphthalocyanine quenchers of fluorescence Unsymmetrical dialkylamino substituted azaphthalocyanines (AzaPcs) have unique photophysical properties - light absorption between 300 and 700 nm, almost no self-fluorescence and ability to quench fluorescence of other compounds. This makes AzaPcs suitable candidates for universal dark quenchers which can be used in real time PCR. In this work, we tried to evaluate differences in quenching between probes labeled in different positions of oligodeoxynucleotide (ODN) chain. Two quenchers bearing different functional groups suitable for different connection to ODN were synthetized (see Fig.). Following the synthesis of the quencher, three different probes were prepared- the first with the quencher in the middle of ODN chain (Fig. A), the second with the quencher attached at the end of ODN chain (Fig. B), and the third with the quencher in the middle and at the end of ODN chain (Fig. C). All prepared ODN probes were purified on HPLC system. Subsequently, the quenching efficiency of these...