Interakce proteinů Whi3 a Yap6 při mírném osmotickém stresu

Abstract

Natural strains of the Saccharomyces cerevisiae growing on solid médium form structured, biofilm -like colonies. This ability is depended on the surface adhesin Flo11p. The expression of the FLO11 gene is upregulated by the RNA-binding protein Whi3p, which is likely to have a negative effect on the level of the transcription factor Yap6p. The aim of this study was to determine whether Yap6p affects colony morphology and FLO11 expression. Analysis of FLO11 expression using the fluorescent proteins pFlo11-GFP and Flo11p-DsRed in WHI3-deletion strains demonstrated a negative effect of Yap6p on FLO11 expression and confirmed changes in the effect of Yap6p on FLO11 expression in the presence of NaCl. In the strain overexpressing YAP6, the fluorescence values of pFlo11-GFP and Flo11p-DsRed were lower than in the strain with deletion of the YAP6 and in the presence of NaCl there was observed the largest increase in fluorescence. Although Yap6 protein is thought to have a negative effect on FLO11 expression under standard culture conditions, it seems to be responsible for a significant increase in FLO11 expression in the presence of mild osmotic stress. In WHI3-deletion strains, there was observed a significant increase in structuredness of colonies growing in the presence of NaCl. Analysis of structured...

Při růstu kolonií přírodních kmenů Saccharomyces cerevisiae na pevném médiu dochází k diferenciaci buněk uvnitř kolonie, která vede ke vzniku strukturovaných kolonií. Schopnost buněk tvořit strukturované kolonie je závislá na povrchovém adhesinu Flo11p. Exprese genu FLO11 je pozitivně regulována pomocí RNA-vazebného proteinu Whi3p, který má pravděpodobně negativní vliv na hladinu transkripčního faktoru Yap6p. Cílem práce bylo zjistit, zda Yap6p ovlivňuje morfologii kolonií a expresi FLO11. Analýzou exprese FLO11 pomocí fluorescenčních proteinů pFlo11-GFP a Flo11p-DsRed u kmenů s delecí WHI3 byl prokázán negativní vliv Yap6p na expresi FLO11 a potvrzeny změny vlivu Yap6p na expresi FLO11 v přítomnosti NaCl. U kmene se zvýšenou expresí YAP6 byly hodnoty fluorescence pFlo11-GFP a Flo11p-DsRed nižší než u kmene s delecí YAP6 a zároveň v přítomnosti NaCl docházelo k největšímu nárůstu fluorescence. Je pravděpodobné, že ačkoliv má protein Yap6 za standardních podmínek kultivace negativní vliv na expresi FLO11, v přítomnosti mírného osmotického stresu je zodpovědný za výrazné zvýšení exprese FLO11. U kmenů s delecí WHI3 bylo pozorováno výrazné zvýšení vrásčitosti kolonií rostoucích v přítomnosti NaCl. Analýzou strukturovaných kolonií u modelového organismu S. cerevisiae lze přispět k objasnění faktorů...