Searching for microtubule inner proteins

Abstract

Diplomová práce Pátrání po vnitřních proteinech mikrotubulů Bc. Václav Bočan Abstrakt Mikrotubuly - válcovité polymery α- a β-tubulinu - vykonávají v eukaryotických buňkách řadu nezastupi- telných funkcí. Jelikož jsou zapojeny do mnoha buněčných dějů, jejich posttranslační modifikace, rychlost polymerizace a interaktom musí být pečlivě regulovány. V nedávné době byl objeven nový způsob inter- akce proteinů s mikrotubuly, a to v podobě vnitřních mikrotubulárních proteinů, které vstupují přímo do lumen mikrotubulů. O vnitřních proteinech dynamických mikrotubulů v cytoplasmě je známo velmi málo. Zatím byly objeveny pouze dva: αTAT1 a MAP6. Stabilizované mikrotubuly, jako například ty v axonemě bičíku, obsahují de- sítky pravidelně uspořádaných vnitřních mikrotubulárních proteinů, přičemž jsou stále objevovány nové. Pravděpodobně hrají úlohu pro výstavbu axonemy a její zpevnění, což je nezbytné pro odolávání mecha- nickým silám vytvářeným v bičíku při pohybu. Tato diplomová práce přispívá k poznání vnitřních mikrotubulárních proteinů, a to jak v dynamických, tak v axonemálních mikrotubulech. Ve své první části se práce věnuje hledání nových vnitřních proteinů uv- nitř dynamických mikrotubulů. K dosažení tohoto cíle jsou využity dva nezávislé přístupy - značení souse- dících proteinů pomocí nespecifické biotin...

Diploma thesis Searching for microtubule inner proteins Bc. Václav Bočan Abstract Microtubules (MTs) - cylindrical polymers of α- and β-tubulin - maintain numerous irreplaceable func- tions in all eukaryotic cells. For this complex involvement of MTs in many cellular processes, precise tuning of their post-translational modifications, polymerization state, and interactome is crucial. Recently, a new mode of interactions with MTs was discovered - several microtubule inner proteins (MIPs) can enter the lumen of MTs. Little is known about MIPs in dynamic MTs in the cytoplasmic network. Only two proteins have been shown to bind to the inside of dynamic MTs so far: αTAT1 and MAP6; other proteins have been suggested to. Stabilised MTs, like the axoneme of the flagellum, contain dozens of orderly bound MIPs in the lumen and new ones are being added. MIPs are believed to play a role during axonemal assembly and to increase the stiffness required for flagellar beating. This diploma thesis investigated MIPs in both dynamic and axonemal MTs. In the first part of the thesis, the goal was to identify candidates for new MIPs in the dynamic MTs by two independent approaches - proximity-labelling by promiscuous biotin ligase using αTAT1 and MAP6 as baits, and direct isolation of MTs from cells and washing away outer...