Fosforylace adaptorového proteinu PSTPIP2 a její role v neutrofilních granulocytech

Abstract

PSTPIP2 is an adaptor protein of the F-BAR family, which is an important regulator controlling the effector mechanisms of innate immune cells. The regulatory functions of this protein were discovered thanks to the CMO mouse strain, which lost the expression of this protein. As a result of PSTPIP2 deficiency, mice of the CMO strain develop an autoinflammatory disease affecting bone tissue and skin. The main mechanism that drives its pathology is the loss of regulation of the neutrophil granulocyte activity. These cells then produce excessive amounts of the pro-inflammatory cytokine IL-1β and reactive oxygen species. However, the exact molecular mechanism of action of the PSTPIP2 protein is unknown. When the PSTPIP2 protein is activated, it is phosphorylated and interacts with other proteins, which mediate its regulatory function. Interaction partners described so far in neutrophil granulocytes include phosphatases of the PEST family, the lipid phosphatase SHIP1 and the non-receptor tyrosine kinase CSK. In this thesis, we identified kinases from the SRC family as kinases that phosphorylate PSTPIP2. Furthermore, we found that the main phosphorylation sites of PSTPIP2 are tyrosines at positions 323 and 329. Finally, we proved that SHIP1 can bind to the phosphotyrosine motif around the tyrosine at...

PSTPIP2 je adaptorový protein z rodiny F-BAR, který je důležitým regulačním proteinem kontrolujícím efektorové mechanismy buněk vrozené imunity. Regulační funkce tohoto proteinu byly objeveny díky myšímu kmeni CMO, který ztratil expresi tohoto proteinu. Následkem deficience PSTPIP2 myši kmene CMO vyvíjejí autoinflamatorní onemocnění postihující kostní tkáň a kůži. Hlavním mechanismem, který pohání jeho patologii, je ztráta regulace aktivity neutrofilních granulocytů, které produkují nadměrné množství prozánětlivého cytokinu IL-1β a reaktivních kyslíkatých sloučenin. Přesný molekulární mechanismus působení proteinu PSTPIP2 je však neznámý. Při aktivaci proteinu PSTPIP2 dochází k jeho fosforylaci a k jeho interakci s dalšími proteiny, jejichž prostřednictvím vykonává svou regulační funkci. Mezi interakční partnery, které byly doposud popsány v neutrofilních granulocytech, patří fosfatázy z rodiny PEST, lipidová fosfatáza SHIP1 a nereceptorová tyrosin kináza CSK. V této diplomové práci se nám podařilo identifikovat kinázy z rodiny SRC jako kinázy fosforylující PSTPIP2. Dále jsme zjistili, že hlavní místa fosforylace PSTPIP2 jsou tyrosiny na pozicích 323 a 329. Na závěr jsme dokázali, že SHIP1 se může vázat na fosfotyrosinový motiv v okolí tyrosinu na pozici 329 a v menší míře i na fosforosinový motiv...