Studium potenciálních anti-adherenčních sloučenin na buněčném modelu plic jako prostředku profylaxe bakteriálních infekcí u cystické fibrózy

Abstract

4 Abstrakt Cystická fibróza (CF) je zákeřné genetické onemocnění s autosomálně-recesivní dědičností. Narušená funkce CFTR proteinu zapříčiněná mutací ve stejnojmenném genu způsobuje celou řadu symptomů, z níž nejzávažnější je ovlivnění respirační soustavy. Hlavním důvodem je výskyt hustého hlenu, který se podílí na kumulaci bakteriálních buněk v plicích pacienta. Mezi životohrožujíci patogeny patří bakterie Burkholderia cenocepacia (BC) a Pseudomonas aeruginosa (PA). Tyto bakterie produkují množství virulentních faktorů, jako jsou např. lektiny BC2L-A či BC2L-C u BC a PA-IIL u PA. Díky nim se bakterie prostřednictvím protein-sacharidových interakcí váží na plicní buňky s pozměněnou glykosylací, která se vyskytuje u nemocného jedince s CF. V této práci byla předmětem studia právě tato lektinová interakce a inhibiční vliv slepičích protilátek IgY nebo trivalentních fukosylovaných glykoklastrů na adherenci BC (kmen ST-32, CCM 7291) / PA (kmen PAK, ST 1763) na buňky epitelu plic linie CuFi-1 (od nemocného jedince s CF) / NuLi-1 (od zdravého dárce). Bylo proto studováno možné ovlivnění viability buněk PA (kmene PA-lux) glykoklastry, které neukázalo žádný signifikantní efekt. Pro ověření exprese lektinu BC2L-C bylo nutné připravit protilátky. Slepičí protilátky proti N-terminální doméně lektinu BC2L-C na "Western...

5 Abstract Cystic fibrosis (CF) is an insidious genetic disease with autosomal-recessive inheritance. The impaired function of the CFTR protein, caused by a mutation in the eponymous gene, results in a wide range of symptoms, the most serious being the effect on the respiratory system. The main impact on the respiratory system is the appearance of thick mucus, which contributes to the accumulation of bacterial cells in the patient's lungs. Life-threatening pathogens include Burkholderia cenocepacia (BC) and Pseudomonas aeruginosa (PA). These bacteria produce several virulence factors such as BC2L-A or BC2L-C lectins in BC and PA-IIL in PA. The virulence factors allow bacteria to bind via protein-saccharide interactions to lung cells with altered glycosylation, which is seen in the CF patient. This diploma thesis focuses on the above-mentioned lectin interaction and the inhibitory effect of hen IgY antibodies or trivalent fucosylated glycoclusters on the adherence of BC (strain ST-32, CCM 7291) / PA (strain PAK, ST 1763) to lung epithelial cells of the CuFi-1 (from a CF patient) / NuLi-1 (from a healthy donor). The possible influence of glycoclusters on PA (PA-lux strain) cell viability was studied, but no significant effect was observed. To verify the expression of the BC2L-C lectin, it was necessary to...