Vývoj DNA vakcíny proti rybímu orthoreoviru 3 (PRV3)

Abstract

V současné době je jedním z nejvýznamnějších rizik pro rybářský průmysl a chov lososovitých ryb infekce rybím orthoreovirem (PRV). Nejvíce abundantní subtyp v Evropě je momentálně PRV-3, který napadá především pstruhy duhové (Oncorhynchus mykiss) a lososy obecné (Salmo salar) a způsobuje velké ekonomické i ekologické problémy. Tento virus vyvolává onemocnění podobné HSMI (heart and skeletal muscle inflammation), které způsobuje jeho příbuzný subtyp PRV-1. Jak název napovídá, onemocnění postihuje hlavně srdeční a kosterní svalovinu. DNA vakcíny jsou, díky jejich poměrně nenáročné a rychlé přípravě, stále více oblíbenou variantou vakcinace ve veterinárním průmyslu. Proto jsme pomocí Gibsonova klonování zkonstruovali dohromady 20 vakcinačních plazmidů, které obsahují geny pro různé virové proteiny (σ1, σ3, μ1). Zároveň jsme geny zkombinovali s různými fúzními partnery a signálními sekvencemi pro zvýšení účinnosti vakcíny. Jednalo se o zajištění sekrece antigenu do mezibuněčného prostoru nebo kotvení antigenu na plazmatickou membránu transfekované buňky. Následně jsme testovali a potvrdili produkci antigenů (σ1, σ3) v transfekované buněčné linii HEK 293T. Podařilo se nám také transfekovat rybí buněčnou linii RTGill-W1, u které nebyla do této doby zaznamenána žádná úspěšná transfekce. Dále jsme úspěšně...

Currently, one of the most significant risks to the fishing industry and salmonid fish farming is fish orthoreovirus (PRV) infection. In Europe, the most abundant subtype is currently PRV-3, which mainly attacks rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) and Atlantic salmon (Salmo salar) and causes great economic and ecological issues. This virus causes a disease similar to HSMI (heart and skeletal muscle inflammation), which is triggered by its related subtype PRV-1. As the name suggests, the disease mainly affects the heart and skeletal muscles. DNA vaccines are, thanks to their relatively undemanding and quick preparation, an increasingly popular variant of vaccination in the veterinary industry. Therefore, we used Gibson cloning to construct a total of 20 vaccine plasmids that contain genes for different viral proteins (σ1, σ3, μ1). At the same time, we combined these genes with different fusion partners and signal sequences to increase the effectiveness of the vaccine. This involved ensuring antigen secretion into the intercellular space or anchoring the antigen to the plasma membrane of the transfected cell. Subsequently, we tested and confirmed the production of antigens (σ1, σ3) in the transfected HEK 293T cell line. We were also able to transfect the fish cell line RTGill-W1, in which no...