Příprava rekombinantního čepičkujícího enzymu z viru opičích neštovic a jeho biochemická charakterizace

Abstract

Following the recent global pandemic caused by the SARS-CoV-2 coronavirus, a new pathogenic virus, monkeypox virus (MPXV), reemerged in early May 2022, raising significant concern. Since the eradication of the deadly smallpox virus in the 1990s, MPXV represents another virus from the Poxviridae family threatening humanity. Initial cases of this virus were recorded in Africa, where occasional small epidemics occur. However, cases have also been reported in Europe and the Americas, including individuals who had not visited affected regions in Africa. As of today, more than 99,000 cases have been recorded in 116 countries. This virus infects not only humans but also dogs, rodents, primates, and other animals. Fortunately, the mortality rate of this virus is not as high as that of smallpox, and symptoms resemble those of influenza, followed by a characteristic rash. MPXV is an enveloped virus with a size of 200- 250 nm and a typical "brick" shape, classifying it as one of the larger viruses. Its genome consists of double-stranded DNA (dsDNA) with a size of 200 kb and encodes approximately 200 proteins. Among these proteins is the capping enzyme responsible for synthesizing the 5′ mRNA cap 0 (cap-0). This enzyme comprises two subunits, E1 and E12. The E1 subunit is catalytically active and contains all...

Po nedávné globální pandemii způsobené koronavirem SARS-CoV-2 se začátkem května 2022 znovu objevil patogenní virus opičích neštovic (MPXV), který vzbudil značné obavy. Od vyhubení smrtelných pravých neštovic v 90. letech minulého století je to další vir z rodiny Poxviridae ohrožující lidstvo. První případy infekce tímto virem byly zaznamenány v Africe, kde se čas od času objeví malá epidemie. Postupně však byly hlášený i případy nákazy v Evropě a Americe, včetně osob, které nenavštívily postižené země v Africe. Do dnešního dne bylo zaznamenáno více než 99 000 případů ve 116 zemích. Tento virus napadá nejen lidi ale také psy, hlodavce, primáty a další. Naštěstí smrtnost tohoto viru není tak vysoká jako u pravých neštovic a symptomy jsou podobné chřipce, doprovázené charakteristickou vyrážkou. MPXV je obalený virus o velikosti 200-250 nm s typickým "cihlovým" tvarem a řadíme ho k větším virům. Jeho genom se skládá z dvouvláknové DNA (dsDNA) o velikosti 200 kb a kóduje zhruba 200 proteinů. Mezi tyto proteiny patří také čepičkující enzym, který je zodpovědný za syntézu 5'mRNA čepičky 0 (cap-0). Tento enzym se skládá ze dvou podjednotek, E1 a E12. Podjednotka E1 je katalyticky aktívní a obsahuje všechny katalytické moduly potřebné pro tvorbu čepičky, RNA trifosfatasu, guanylyltransferasu a...