Interakce myšího polyomaviru s jadernými proteiny

Abstract

Průběh polyomavirové infekce může být v jádře regulován řadou buněčných proteinů. K replikaci myšího polyomaviru (MPyV) v buněčném jádře dochází v těsné blízkosti jaderných tělísek PML, jejichž součástí je i protein DAXX. DAXX je restrikčním faktorem mnoha virů, byl však popsán také jeho pozitivní vliv na replikaci některých herpesvirů a papilomavirů. První část této práce se soustředila na vliv proteinu DAXX na replikační cyklus MPyV. V buňkách s potlačenou expresí DAXX byl pozorován pokles replikace virové DNA a nižší hladiny časných i pozdních virových transkriptů. Výsledky naznačují pozitivní vliv proteinu DAXX na replikaci MPyV. Dalším cílem bylo připravit buněčnou linii DAXX KO pro studium vlivu DAXX na infekci BK polyomavirem. Modifikace byla provedena systémem CRISPR/Cas9, byly izolovány potenciální DAXX KO buněčné klony, u kterých bude dále ověřena delece genu DAXX. Druhá část diplomové práce byla zaměřena na interakce velkého T antigenu (LT) MPyV s buněčnými proteiny. V návaznosti na data získaná studiem interaktomu LT antigenu MPyV (experimenty provedené Mgr. Karolínou Štaflovou, Ústav organické chemie a biochemie AV ČR, skupina Ing. Ivy Pichové, CSc.) byla sledována vzájemná lokalizace LT a vybraných buněčných proteinů. Byla pozorována kolokalizace LT s proteiny BAF57, BAG2, PRC1, WDR48...

The course of polyomavirus infection can be regulated in the nucleus by a number of cellular proteins. Replication of mouse polyomavirus (MPyV) in the cell nucleus occurs in close proximity to PML nuclear bodies, which also contain the DAXX protein. DAXX is a restriction factor for many viruses, but its positive effect on the replication of some herpesviruses and papillomaviruses has also been described. The first part of this work focused on the influence of DAXX protein on MPyV replication cycle. A decrease in viral DNA replication and lower levels of both early and late viral transcripts were observed in cells with suppressed DAXX expression. The results indicate a positive effect of DAXX protein on MPyV replication. Another goal was to prepare a DAXX KO cell line to study the effect of DAXX on BK polyomavirus infection. The modification was carried out using the CRISPR/Cas9 system, and potential DAXX KO cell clones were isolated, in which the deletion of the DAXX gene will be further verified. The second part of this thesis was focused on the interactions of MPyV large T antigen (LT) with cellular proteins. Based on the data obtained from the study of MPyV LT antigen interactome (experiments performed by Mgr. Karolína Štaflová, Institute of Organic Chemistry and Biochemistry of the Academy of...