Laserová mikrodisekce ve forenzní genetice: optimalizace genetické analýzy stop sexuálního násilí

Abstract

Laserová mikrodisekce je nová metoda separace buněk pod mikroskopem pomocí laserového paprsku. Ve forenzní genetice se mimo jiné používá k separaci buněk ze smíšených biologických stop, jako je např. vaginální stěr při vyšetřování znásilnění. V případech sexuálního násilí se často podaří zajistit pouze několik desítek buněk pachatele, podle kterých jej lze individuálně identifikovat. Pokud se navíc jedná o spermie, tedy velice odolné buňky, je účinná a spolehlivá metoda genetické analýzy nezbytná k úspěšnému vyřešení případu. Náplní této práce je optimalizace genetické analýzy spermií odebraných laserovou mikrodisekcí. Dalším z cílů je zavedení optimální metody genetické analýzy do forenzní praxe, aby bylo možno individuálně identifikovat pachatele i z několika jednotlivých buněk. Genetická analýza byla optimalizována pro spermie separované ze vzorků ejakulátu a poté ověřena na experimentálních vzorcích vaginálního stěru. V průběžných výsledcích testování došlo k výskytu tzv. artefaktů, které zřejmě souvisí s analýzou limitně malého množství DNA. V práci jsou diskutována možná řešení problému s výskytem artefaktů. Celkově se podařilo vytvořit postup genetické analýzy mikrodisekčně odebraných vzorků, který je dostatečně účinný a spolehlivý. Z 10 spermií odebraných z vaginálního stěru se podařilo stanovit...

Laser microdissection is a novel technique of cell separation under microscopic view utilizing a laser beam. It has been used for cell separation from mixed samples in forensic genetics, such as vaginal smear in cases of sexual assault. In a rape investigation, few cells are usually recovered as the only evidence available for the assailant identification. When analysing a resistant cell type such as sperms, an effective and reliable method is required. This study aims to optimise the genetic analysis of laser microdissected sperms and to take the optimal protocol into practice. The goal is to develop a technique capable of recovery of reliable genotyping results from just a few cells. Genetic analysis was optimised for sperms separated from pure semen samples by laser microdissection. After optimisation, it was validated for sperms recovered from a vaginal smear. In the resulting genetic profiles some artifacts occured, that have been reported in samples with low DNA content. Possible solutions of these artifacts occurrence and elimination are discussed. In conclusion, the developement of an efficient and reliable genetic analysis method was successful: 10 sperms were recovered from vaginal smear and the genotyping result was capable of individual identification of the sperm donor. Powered by TCPDF...