Studium receptorů NKR-P1A a NKR-P1B exprimovaných v eukaryotických organismech

Abstract

Důležitou součástí imunitního systému jsou NK (natural killer) buňky, které mají schopnost identifikovat antigeny a cizorodé látky přítomné v organismu prostřednictvím molekulově rozmanitých receptorů. Mezi receptory přirozených zabíječů patří lektinové proteiny NKR-P1A a NKR-P1B, jejichž ligandy jsou převážně terminální oligosacharidy glykoproteinů na cílových (např. nádorových) buňkách. Po interakci sacharidových struktur na povrchu antigenů s jejich vazebnými partnery na NK receptorech jsou spouštěny výkonné mechanismy NK buněk, které příslušné cílové buňky zabíjí. V současné době jsou poznatky v oblasti NK buněk, jejich receptorů a interakcích s ligandy značně využívány při léčbě nádorů, virových a autoimunitních onemocnění. Exprese heterologních proteinů v eukaryotických organismech s sebou přináší mnoho výhod. Methylotrofní kvasinka Pichia pastoris je, na rozdíl od prokaryotických organismů, schopná post-translačních modifikací, jejichž výsledkem jsou biologicky aktivní molekuly exprimovaných proteinů. Expresní systém P. pastoris má obvykle vysokou úroveň exprese proteinů a je obecně pokládán za rychlejší, snažší a levnější ve srovnání s jinými eukaryotními systémy. V této diplomové práci jsou předkládány výsledky přípravy expresního vektoru, vhodného pro expresi potkaních proteinů NKR-P1A a...

NK (natural killer) cells, with their ability to identify antigens and extraneous substances, available in the organism through various moleculary receptors, are an important component of the immune system. The NKR-P1A and NKR-P1B proteins belong to the lectin receptors of natural killer cells. Primary ligands of lectin receptors comprise terminal oligosaccharides of glycoproteins on the surface of target (e.g. tumor) cells. The interaction between carbohydrate structures on the surface of antigens and their binding partners on NK receptors is followed by triggering the effector function of NK cells against the targets. The NK cells and NK receptors findings and their interactions with ligands are greatly utilized in the treatment of cancer, viral and autoimmune diseases. Heterologous protein production in the eukaryotic organism brings a lot of advantages. Unlike the prokaryotic organism, the methylotrophic yeast Pichia pastoris has the capability of performing many posttranslational modifications resulting in production of biological active protein molecule. Usually, the P. pastoris expression system disposes of high level protein expression and is also generally regarded as being faster, easier, and less expensive to use than expression systems derived from other eukaryotes. In this thesis, I...