Příprava experimentálního systému pro studium životního cyklu myšího polyomaviru

Abstract

Příprava experimentálního systému pro studium životního cyklu myšího polyomaviru Abstrakt: Myší polyomavirus je modelovým zástupcem virové čeledi Polyomaviridae. Do této čeledi patří i některé významné lidské patogeny (BKV, JCV, Merkel cell polyomavirus). Díky některým svým vlastnostem viry z této čeledi mohou sloužit i jako vektory pro genovou terapii, nebo pro přípravu rekombinatních vakcín. Nové metodické přístupy mohou pomoci k porozumění dosud neznámých faktů ze životního cyklu myšího polyomaviru. Objasnění některých dějů životního cyklu může být důležité z hlediska možného využití polyomavirů pro terapeutické účely. Tato diplomová práce se zabývá přípravou dvou inovativních experimentálních systémů, které rozšiřují možnosti studia životního cyklu myšího polyomaviru. První část diplomové práce je zaměřena na přípravu rekombinantního myšího polyomaviru exprimujícího žlutý fluorescenční protein (EYFP) v časných fázích infekce. Takový virus může být vhodným nástrojem pro studium šíření infekce v živých buňkách metodami fluorescenční mikroskopie i průtokové cytometrie. Lze jej využít i pro studium kolokalizace nestrukturního proteinu velkého T antigenu s některými buněčnými proteiny. V druhé části diplomové práce je popsána příprava hybridní buněčné linie připravené fúzí myších a opičích buněk. Tato...

Experimental system for the mouse polyomavirus life cycle study Abstract: Murine polyomavirus (MPyV) is the prototype of the Polyomaviridae family. This family includes also some important human pathogens (BKV, JCV, Merkel cell polyomavirus). Due to their specific properties viruses within this family may serve as versatile vectors for gene therapy or recombinant vaccine production. New methodological approaches may help to understand some yet unknown facts about MPyV life cycle. Clarification of some processes during murine polyomavirus life cycle may be also important to fully exploit polyomaviruses for therapeutic purposes. The aim of this diploma thesis was to preparare two innovative experimental systems that extend possibilities of studying the life cycle of MPyV. The first part of the diploma thesis focusses on construction of recombinant MPyV which expresses yellow fluorescent protein (EYFP) in the early stages of infection. Such virus can be very useful for studying the infection spreading by live- cell imaging and Fluorescence-Activated Cell Sorting (FACS) and can be employed for co- localization studies of YFP-tagged LT antigen with certain cellular proteins. Second part of the diploma thesis describes preparation of a hybrid cell line prepared by fusion of mouse and monkey cells. This new cell...