Porovnání tvorby cytokinů novorozeneckými leukocyty dětí zdravých a alergických matek.

Abstract

Rostoucí incidence alergických onemocnění u dětí by mohla být způsobena senzibilizací nezralého imunitního systému během intrauterinního vývoje. Několik významných vědeckých prací prokázalo schopnost buněk pupečníkové krve odpovídat zvýšenou proliferační aktivitou na stimulaci běžnými alergeny. V návaznosti na tyto poznatky předkládaná studie sleduje tvorbu cytokinů hrajících roli v pro i proti alergenním ladění imunitního systému. Buňky pupečníkové krve byly stimulovány polyklonálními aktivátory (fytohemaglutinin) a běžnými alergeny (ovalbumin, bojínek, bříza, roztoč). Následně pak byla sledována tvorba cytokinů využitím vybraných metod, které odrážejí různá stádia aktivace buňky - na úrovni mRNA pomocí kvantitativního real time PCR (qRT-PCR), detekcí přítomnosti intracelulárních cytokinů v jednotlivých buněčných subpopulacích průtokovou cytometrií a měřením koncentrace cytokinů v supernatantech kultur CBMC pomocí ELISA metody. Dosažené výsledky poukazují na velmi slabou schopnost uvedených běžných alergenů (bojínek, bříza, roztoč, ovalbumin) stimulovat CBMC k tvorbě cytokinů sledovaných všemi uvedenými metodickými postupy. Ačkoliv jsme nepozorovali signifikantní rozdíly v produkci cytokinů (IL-2, IL-4, IL-10, IL-12, IL-13, IL-17, IFN-γ, TGF-β) CBMC po stimulaci alergeny (OVA, BOJ, BRI, ROZ) mezi...

The increasing incidence of children suffering from allergic diseases could be caused by sensitization of immature immune system during the intrauterine development. Several important scientific papers have demonstrated the ability of cord blood cells to respond by elevated proliferation activity after stimulation by common allergens. Following these findings, present study follows the production of cytokines which play a role in the pro- and anti-allergenic tuning of the immune system. Umbilical cord blood cells were stimulated with polyclonal activators (phytohaemagglutinin) and common allergens (ovalbumin, timothy grass, birch, mite). Subsequently, cytokine production was monitored using selected methods that reflect different stages of cell activation - at the level of mRNA by quantitative real time PCR (qRT-PCR), by flow cytometry detection of the presence of intracellular cytokines in different cell subpopulations and by ELISA measurement of cytokines in CBMC culture supernatants. The results obtained point to a very weak ability of these common allergens (timothy grass, birch, mite, ovalbumin) to stimulate CBMC to produce cytokines observed by all of these methodological procedures. Although we did not observe significant differences in CBMC cytokine production (IL-2, IL-4, IL-10, IL-12,...