Molekulární diagnostika motolice obrovské (Fascioloides magna).

Abstract

1. ABSTRAKT Fascioloides magna (motolice obrovská) je veterinárně významný endoparazitický helmint parazitující u mnoha obratlovců (především u přežvýkavců), který svým hostitelům může působit vážné zdravotní problémy, jež často vedou až k jejich smrti. Tato motolice parazituje především u jelenovitých, dokáže však napadat i hospodářská zvířata. Místem definitivní lokalizace dospělců F. magna je jaterní tkáň hostitele, kde v pseudocystách dospělci dlouhodobě přežívají a produkují vajíčka. Vajíčka odchází z pseudocyst přes žlučovody do střeva a následně opouští tělo hostitele společně s trusem. Diagnostika fascioloidózy je doposud založena především na postmortálním vyšetření jater uhynulých hostitelů. Vhodnou alternativou mohou být některé přímé a nepřímé metody intravitální diagnostiky. S využitím přímé metody - mikroskopicky, na základě nálezu vajíček v koprologickém materiálu hostitele, lze parazitózu sice prokázat, ale nelze spolehlivě odlišit nákazu F. magna od dalších případných trematodóz (působených např. Fasciola hepatica a Paramphistomum cervi). Spolehlivě odlišit vajíčka F. magna od ostatních motolic je možné molekulárně. Byly testovány metody izolace parazitární DNA z dospělců, z koncentrovaných vajíček i z vajíček v trusu. DNA byla amplifikována pomocí PCR a Real-time PCR. Pro amplifikaci DNA...

1. ABSTRACT Fascioloides magna (giant liver fluke) is veterinary important endoparasitic helminth parasitizing in a number of vertebrate species (primarily in ruminants), causing them severe health problems, often leading to death. This trematod primarily parasitizing in cervids, but it is also able to infect livestock. The F. magna adults are mostly localized in the liver tissue of the definitive hosts, where they survive in pseudocysts for a long time and produce eggs. The eggs are released from the pseudocysts via the bile ducts into the gut and then leave the host's body together with faeces. Up to now, the diagnostics of fascioloidosis is primarily based on the dissection of the host's liver. The direct and indirect intravital diagnostic methods could represent an appropriate alternative. Using the intravital diagnostic methods, the parasitosis can be revealed directly, microscopically - by discovering the eggs in the host's faeces, but by using this method it is not possible to reliably differentiate the eggs of F. magna from the other eventual trematodes e.g. Fasciola hepatica, Dicrocoelium dendriticum, Paramphistomum cervi. Reliable differentiation of F. magna eggs from the other eventual trematodes can be performed molecularly - by isolation of parasite's DNA followed by PCR. Several methods were...