Molekulární aspekty kalcio-fosfátového metabolizmu u ledvinových komplikací diabetu mellitus.

Abstract

Úvod: Diplomová práce se zabývá kalcio-fosfátovým metabolismem a jeho roli při rozvoji chronických diabetických komplikací. Zkoumá kalcium sensitivní receptor, který může mít klíčový význam v ovlivnění kalciového metabolismu. Kalcium senzitivní receptor se pravděpodobně podílí na intrabuněčné signalizaci a metabolických pochodech, které vedou k proliferaci extracelulární matrix a k počátku diabetické nefropatie. Byly zkoumány 2 polymorfismy tohoto genu pro kalcium senzitivní receptor (intron 4 a codon 990). Materiál a Metody: Do studie bylo zařazeno 313 diabetických pacientů, z toho 41 pacientů s diabetem 1.typu, 106 pacientů s diabetem 2.typu, 110 pacientů diabetiků 2. typu, kteří trpěli diabetickou nefropatií a 56 pacientů s nediabetickým renálním selháním (NDRD). Dále bylo vyšetřeno 72 nediabetických pacientů s chronickým renálním selháním (CKD) a 96 zdravých dárců krve (ZK). Klasifikace jednotlivých diagnóz je uvedena v části teorie. DNA byla izolována QIAamp DNA Blood Mini Kitu a vysolovací metodou. Pomocí PCR byly amplifikovány specifické fragmenty genu pro CaSR. Pro detekci byl použit polymorfismus délky restrikčních fragmentů a TaqMan sondy. Pro určení hladiny exprese mRNA byla použita metoda real-time PCR. Výsledky: U polymorfismu "codon 990" jsme zjistili statisticky významnost ve frekvenci...

Introduction: This thesis deals with the calcium-phosphate metabolism and its role in the development of chronic diabetic complications. It examines calcium sensitive receptor, which can be crucial in affecting calcium metabolism. Calcium-sensitive receptor may play a role in intracellular signaling and metabolic pathways that lead to cell proliferation and extracellular matrix early diabetic nephropathy. We investigated two polymorphisms of the gene for calcium-sensitive receptor (intron 4 and codon 990). Material and Methods: The study included 313 diabetic patients, 41 patients with type 1 diabetes, 106 patients with type 2 diabetes, 110 diabetic patients with type 2 diabetes who had diabetic nephropathy and 56 patients with renal failure non-diabetic (NDRD). It was also examined 72 non-diabetic patients with chronic renal failure (CKD) and 96 healthy blood donors (ZK). Classification of diagnoses is listed in the theory. DNA was isolated by QIAamp DNA Blood Mini Kit and salting method. The specific fragments of gene for the CaSR were amplified by PCR. For detection, restriction fragment length polymorphism and TaqMan probes were used. The expression levels of mRNA were determined by real-time PCR. Results: For the codon 990 polymorphism, we found statistical significance of the genotype frequencies (AA,...