Role fibroblastového aktivačního proteinu v růstu a invazivitě gliomových buněk

Abstract

Astrocytární tumory vysokého stupně malignity jsou velice progresivní mozkové nádory. Glioblastoma multiforme je nejčastější a nejmalignější typ s infiltrativním fenotypem nádorových buněk. Fibroblastový aktivační protein (FAP) je prolyl peptidáza převážně vázaná na membránu a vykazující exo- a endopeptidázovou hydrolytickou aktivitu. Je známo, že se FAP podílí na hojení ran, buněčné migraci a invazi a jeho xprese je spojována s patogenezí řady malignit. Exprese FAP mRNA je podle microarray dat z The Cancer Genome Atlas zvýšena ve 48% glioblastomů. Vliv FAP na patogenezi astrocytárních nádorů není objasněn. Cíly této práce je analyzovat expresi FAP v primárních gliomových kulturách odvozených od gliomů vysokého stupně malignity a analýza vlivu FAP na růst, migraci a invazi gliomových buněk. Naše výsledky z ELISA a wester blotu ukázaly heterogenní expresi napříč studovanými gliomovými primárními buněčnými kulturami a permanentími liniemi. Obě enzymové aktivity charakteristické pro FAP byly detekovány v primární gliomové kultuře P11 s vysokou expresí FAP. Pomocí imunofluorescenčního značení se ukázalo, že v těchto buňkách se FAP nacházel nejen na plasmatické membráně, kde je typicky lokalizován, ale také v cytoplazmě. Buňky z kultury P11 byly tumorigenní v immunodeficientních myších a udržely si...

High grade astrocytomas are very progressive brain tumors. Glioblastoma multiforme is the most frequent and the most malignant type with very infiltrative phenotype of the tumor cells. Fibroblast activation protein FAP is a predominantly membrane bound prolyl peptidase bearing exo- and endopeptidase hydrolytic activities. FAP is known to play a role in wound healing, cell migration and invasion and its expression is linked to the pathogenesis of several malignancies. mRNA expression of FAP is upregulated in 48% of glioblastomas according to The Cancer Genome Atlas microarray data. The involvement of FAP in the pathogenesis of astrocytic tumors is largely unknown. The aims of this work are to analyse the expression of FAP in primary cell cultures derived from high grade gliomas and to analyse the influence of FAP on the growth, migration and invasion of glioma cells. Our ELISA and western blot results showed heterogenous expression of FAP in the studied glioma primary cell cultures and cell lines. Both enzymatic activities characteristic of FAP were detected in the primary glioma cell culture P11 with high expression of FAP. In these cells, FAP was present not only in the typical plasma membrane localization, but also in the cytoplasm as demonstrated by immunofluorescence staining. The P11 cells...