Fyzické mapování vazebně neidentifikovaných oblastí pomocí BAC klonů u Xenopus tropicalis

Abstract

Xenopus leavis, který byl ve 20.století oblíbeným modelovým organismem je v současné době nahrazován diploidním druhem Xenopus tropicalis, který má nejenkratší generační dobu, ale i menší genom. Jedním z nedostatků Xenopus tropicalis je absence úplné vazebné a fyzické mapy. Podle JGI genomové databáze (assembly 4.1) se nachází na krátkém raménku chromozómu 2 a 7 nemapované oblasti, do kterých byly v novější verzi (assembly 7.1) přiřazena řada BAC klonů s osekvenovaným jedním nebo oběma konci. Vyvstává ovšem otázka, zda tyto 100 bp dlouhé sekvence stačí k unikátnímu zařazení BAC klonu do genomu Xenopus tropicalis. S cílem ověření správnosti zařazení těchto BAC klonů v JGI databázi byly vybrány BAC klony, které se podle databáze nachází na krátkém raménku chromozómu 2. Pomocí fluorescenční in situ hybridizace byly tyto BAC klony lokalizovány na metafázních chromozómech. Vybrané BAC klony vykazovaly signál na krátkém raménku chromozómu 1, místo na krátkém raménku chromozómu 2 a ve většině případech byly opačně orientované, což ukazuje na to, že koncová sekvence 100 pb je pravděpodobně nedostatečná k unikátní identifikaci BAC klonu do chromozómu.V rámci této práce byl zaveden funkční protokol pro izolaci a značení BAC DNA

Xenopus leavis was a favorite model organism during the 20th. century, but nowadays it has been replaced by diploid Xenopus tropicalis, which has not only shorter generation time, but also smaller genom. One of the disadvantages of Xenopus tropicalis is the lack of full physical and linkage map. According to JGI genome database (assembly 4.1) there are unmapped regions on short arm of the chromosome 2 and 7 . Several BAC clones ( with a single or dual-end sequence) has been found to be located within this region, according to a recent assembly 7.1. However , it isn't clear whether 100bp length of BAC ends is enough to place entire BAC clone into the genom of Xenopus tropicalis. In order to prove correct inclusion of these BAC clones into JGI database, several BAC clones, which are supposed to be located on short arm of chromosome 2, were picked. Using fluorescence in situ hybridisation, the signal of these BAC clones was localised on the short arm of chromosome 1 instead of chromosome 2 and in most cases they had opposite orientation. It means that the 100bp lenght of BAC ends propably isn't sufficient to place entire BAC clone on chromosome. New working protocol of BAC DNA isolation and labeling was established.