Sekretované aspartátové proteázy kvasinky Candida parapsilosis.

Abstract

Candida parapsilosis je oportunistický patogen člověka způsobující řadu infekcí. Mezi nejvíce ohroženou skupinu pacientů patří jedinci s oslabenou imunitou. Narůstající četnost infekcí spojená se vznikem rezistentních kmenů se stala hlavním důvodem pro hledání nových metod léčby. Jedním z možných řešení mohou být přístupy zabývající se inhibicí sekretovaných aspartátových proteáz, které jsou považovány za jeden z virulentních faktorů kandid. Genom C. parapsilosis obsahuje tři geny kódující sekretované aspartátové proteázy SAPP1, SAPP2 a SAPP3. Zatímco izoenzym Sapp1p byl dobře biochemicky i strukturně charakterizován, izoenzymům Sapp2p a Sapp3p byla doposud věnována jen malá pozornost. První část této diplomové práce je zaměřena na rentgenostrukturní analýzu vazby vybraných peptidových inhibitorů do aktivního místa izoenzymu Sapp1p a na vazbu známého inhibitoru aspartátových proteáz Pepstatinu A do aktivního místa izoenzymu Sapp2p. Druhá část této práce je spjata se zjištěním, že C. parapsilosis patří mezi kandidy, jež překládají standartní leucinový kodón CUG majoritně serinem. Ačkoliv se jedná o nekonzervativní záměnu hydrofobní aminokyseliny za hydrofilní, je tato unikátní schopnost některými druhy kandid udržována více jak 170 mil. let. Přestože se již některé studie věnovaly selekčním výhodám a...

Candida parapsilosis is an opportunistic fungal pathogen of humans causing a variety of infections. Immunocompromised individuals represent the most threatened group of patients. The increasing frequency of infections and occurrence of drug resistant strains are the main reasons for research focused on novel antimycotic compounds. Inhibition of secreted aspartic proteases (Sap) of pathogenic Candida spp. appears to be a potential target of therapeutic intervention. The genome of C. parapsilosis contains at least three genes coding for secreted aspartic proteases, denominated SAPP1-3. Protease Sapp1p has been well biochemically and structurally characterized, whereas Sapp2p and Sapp3p have been given less attention. The first part of the thesis is focused on structural analysis of Sapp1p complexes with selected peptidomimetic inhibitors binding to the active site of the enzyme. In addition, complex of the isoenzyme Sapp2p with the well-known secreted aspartate inhibitor Pepstatin A has been analyzed. The second part is related to the fact that C. parapsilosis belongs to the Candida spp. with the unique ability to translate standard leucine CUG codon mostly as serine. Even though it is a non-conservative substitution of hydrophobic amino acids for a hydrophilic one, this unique ability is maintained for more...