Výzkum účinné antivirové imunity po transplantaci.

Abstract

Deplece imunitních funkcí po transplantaci hematopoetických kmenových buněk vede u pacientů ke zvýšené náchylnosti k různým oportunistickým infekcím. Obzvláště pak reaktivace cytomegaloviru (CMV) může způsobovat život ohrožující infekce a vyžaduje protivirovou léčbu. V této práci sledujeme a porovnáváme výsledky specifické stimulace CMV antigeny na CD4+ a CD8+ T-buňkách u 63 pacientů po HSCT. Díky použití průtokové mnohobarevné cytometrii, jsme byli schopni detekovat zároveň míru exprese CD154 (CD40L), intracelulárních cytokinů (INF-γ a IL-2) a znaku degranulace (CD107a), a stanovit tak funkční status různých typů T-lymfocytů. Zjistili jsme, že duální produkce INF-γ a IL-2 na CD8+ T-lymfocytech se vyskytuje u pacientů, kteří CMV reaktivaci kontrolují, zatímco u nekontrolujících pacientů se tato populace nevyskytuje. CD8+ T- buňky produkující pouze INF-γ byly početně zastoupeny v největší míře, ale představují spíše neprotektivní paměťové buňky. Dále jsme vyvinuly dva funkční testy NK-buněk. Jeden, který se zaměřuje na detekci jejich degranulace a druhý detekující cytotoxickou schopnost NK-buněk. Klíčová slova: transplantace, hematopoetické kmenové buňky, T-lymfocyty, obnova imunity, cytomegalovirus, INF-γ, IL-2

Depletion of immune functions in patients after hematopoetic stem cell transplantation (HSCT) results in higher frekvencies of several types of oportunistic infections. Especially the reactivation of human cytomegalovirus (CMV) may cause life-threating infections and require antiviral treatment. Within this diploma thesis we compare the function signatures of CD4+ and CD8+ T-cells stimulated by CMV antigens, which were obtained from 63 pacients after HSCT. Polychromatic flow cytometry measurements of CD154 (CD40L), intracellular cytokines (INF-γ and IL-2) and marker of degranulation (CD107a) allowed us to determine the function status of various T-cells simultaneously. We have discovered, that dual production of INF-γ and IL-2 on CD8+ T-cells was present only in pacients controling their CMV reactivations, but was absent in noncontrolers. Single production of INF-γ on CD8+ T-cells was the most abundat subtype, but they most probably represent non-protective memory cells. We have further created two test of NK-cells functionality, one that aims on the detection of their degranulation ability and second, that detects cytotoxic capability of NK-cells. Key words: transplantation, hematopoetic stem cells, T-lymfocytes, immune system recovery, cytomegalovirus, INF-γ, IL-2