Testování embryotoxicity vybraných lidských teratogenů na zárodcích kuřete.

Abstract

Teratogeny jsou faktory zevního prostředí schopné vyvolat u exponovaných jedinců vývojovou či vrozenou vadu. Metody používané k odhalení embryotoxického účinku látek jsou buď klasické, využívající laboratorní savce, nebo alternativní, využívající systémů in vitro či in ovo. Alternativní metody testování se od klasických metod liší především tím, že jsou zbaveny metabolismu mateřského organismu, který do systému vnáší vysokou variabilitu výsledku. V této diplomové práci byly použity dvě alternativní metody testování využívající kuřecího zárodku. První byla in ovo metoda CHEST (Jelínek, 1977), kterou lze použít k aplikaci testované látky od ED2 do ED6. Nevýhodou metody CHEST je výrazné naředění testované látky po její subgerminální aplikaci na ED2. Proto jsme vyvinuli in vitro metodu SANDWICH, při které k naředění testované látky nedochází. Cílem práce bylo vypracovat in vitro metodu SANDWICH za použití prokázaného teratogenu (all-trans retinové kyseliny) a jeho rozpouštědla (dimethyl sulfoxidu), dále stanovit odhadovaný začátek pásma embryotoxicity obou testovaných látek pomocí metody SANDWICH a CHEST a výsledky z obou metod porovnat. V této práci jsme potvrdili embryotoxický účinek all-trans kyseliny retinové jak pomocí metody CHEST, tak pomocí metody SANDWICH. Embryotoxický efekt dimethyl...

Teratogenes are external environmental factors that can cause a developmental or a congenital defect in exposed individuals. The methods used for detecting the embryotoxic effect of substances are the classic when laboratory mammals are used and the alternative which use in vitro and in ovo systems. The main difference between these two is that the alternative methods lack metabolism of maternal organism. The metabolism of maternal organism brings a high variability of results to systems of the classic methods. We used two alternative methods in this thesis, both using chicken embryo. The first of them was in ovo method called CHEST (Jelínek, 1977). CHEST method can be used for administration of tested substances from ED2 to ED6. The disadvantage of this method is due to the dilution of the tested substance after subgerminal application at ED2. Therefore we developed in vitro method called SANDWICH. No dilution occurs while using the SANDWICH method. The aim of this study was to develop in vitro method SANDWICH while using proven teratogene (all-trans retinoic acid) and its solvent (dimethyl sulfoxide), to estimate beginning of the embryotoxicity dose range for both substances using CHEST and SANDWICH, and finally to compare obtained results. We confirmed the embryotoxic effect of all-trans...