Koinfekce leishmanií a gregarin u flebotomů

Abstract

Tato diplomová práce se skládá ze dvou vzájemně navazujících částí. První část se zabývá vlivem gregariny Psychodiella sergenti na náchylnost flebotoma Phlebotomus sergenti vůči experimentální nákaze Leishmania tropica. Při srovnání turecké kolonie P. sergenti infikované gregarinou a izraelské kolonie bez gregarin jsme u turecké kolonie prokázali signifikantně vyšší intenzitu infekce L. tropica druhý a desátý den po infekčním sání a rychlejší kolonizaci stomodeální valvy promastigoty. Tyto rozdíly však zřejmě nejsou způsobeny gregarinou, ale vnitrodruhovou variabilitou P. sergenti nebo rozdílným složením střevní mikroflory u obou kolonií. U dvou kolonií P. sergenti původem z Izraele (jedna infikovaná gregarinami, druhá nikoli) jsme žádný signifikantní rozdíl nezaznamenali; kolonie se nelišily v procentu infikovaných samic, intenzitě infekce ani v lokalizaci promastigotů L. tropica. V druhé části mé diplomové práce byly pomocí degenerovaných primerů navržených na základě sekvencí imunitních molekul z Phlebotomus papatasi a Lutzomyia longipalpis a následného klonování produktů pomocí pGEM®-T Easy Vector Systems získány sekvence čtyř imunitních molekul P. sergenti: cekropinu, serpinu, TEPu (thiolesther containing proteins) a PGRP - LB (peptidoglycan recognition protein). Pomocí qPCR byla měřena...

This thesis consists of two related parts; the first one deals with the effect of gregarines Psychodiella sergenti on susceptibility of sand fly Phlebotomus sergenti to experimental infection of Leishmania tropica. Comparison of the Turkish colony of P. sergenti infected by gregarines (TRG) and the Israeli colony noninfected by gregarines (IS) revealed significantly higher intensity of L. tropica infection in TRG colony on days 2 and 10 after the infective bloodmeal. In addition, in TRG colony leishmania promastigotes significantly faster colonised the stomodeal valve. However, these differences seems to be caused not due to the presence of gregarines but due to intraspecific genetic variability of P. sergenti or different composition of gut microbiota in both colonies. In two colonies of P. sergenti originally from Israel, one infected by gregarines (ISG) and the second noninfected (IS), no significant difference was found. ISG and IS colonies did not differ in the percentage of infected females, the intensity of infection and the localization of L. tropica promastigotes. In the second part of my thesis, degenerated primers designed on the basis of sequences of immune molecules of Phlebotomus papatasi and Lutzomyia longipalpis and subsequent cloning of products by means of pGEM®-T Easy Vector...