Studium migračního potenciálu testikulárních kmenových buněk u Xenopus tropicalis

Abstract

Problematika kmenových buněk díky svému možnému terapeutickému potenciálu představuje jednu z nejperspektivnějších oblastí oblastí biologie. Náplní této diplomové práce bylo studium migračního potenciálu testikulárních kmenových buněk Xenopus tropicalis, jejichž kultura byla založena z varlat juvenilních samců v laboratoři školitele. Díky vnějšímu oplození a embryonálnímu vývoji představuje Xenopus ideální modelový organismus pro transplantační a mikroinjekční experimenty in-vivo. Transplantance vitálně (PKH26) označených testikulárních kmenových buněk do blastul a periteonea pulců prokázala jejich široký migrační potenciál čítající střevo (entoderm), srdce, pronefros, genitální rýhu (mezoderm), epidermis a nervová soustava (ektoderm). Na základě mých experimentů jsem zjistila, že ideální množství transplantovaných buněk se pohybuje v rozmezí mezi 250-500 na jednoho pulce. Pro účely další charakterizace těchto kmenových buněk jsem zkonstruovala plazmidový vektor nesoucí gen pro červený fluorescenční protein. Tento plazmid byl posléze použit k přípravě žab celotělně exprimujících Katushka RFP pod kontrolou CAG promotoru. Po křížení transgenních jedinců s divokým typem bude v rámci jejich potomstva možné použít RFP pozitivní samce k založení kultury testikulárních kmenových buněk stabilně exprimujících...

Because of their possible therapeutic potential stem cells are one of the most promising fields of study in biology. The aim of this thesis was to study the migration potential of testicular stem cells of Xenopus tropicalis, whose culture was established from the testes of juvenile males in the laboratory of my supervisor. Due to external fertilization and embryonic development Xenopus represents an ideal model organism for transplantation and microinjection experiments in-vivo. Transplantation of vital marked (PKH26) testicular stem cells into blastula and peritoneum of tadpoles showed their wide migratory potential including intestine (entoderm), heart, pronephros, genital groove (mesoderm) and epidermis (ectoderm). Based on my experiments, I found that the ideal number of cells for transplantation ranges between 250-500 per tadpole. To further characterize the stem cells, I constructed a plasmid vector carrying a gene for a red fluorescent protein. This plasmid was then used for preparation of frogs with whole-body expression of Katushka RFP under control of CAG promoter. The next aim is to gain the RFP positive offspring by crossing the transgenic individuals with the wild type. Male offspring can be used for establishing culture of testicular stem cells stably expressing the reporter gene. In this way...