Minoritní strukturní proteiny polyomavirů: Vlastnosti a interakce s buněčnými strukturami

Abstract

I když jsou polyomaviry intenzivně zkoumány více než 60 let, stále není dostatečně objasněna role minoritních strukturních proteinů VP2 a VP3 v některých důležitých krocích životního cyklu viru, a to zejména jejich úloha při dopravení virového genomu do jádra a také jejich zapojení v pozdní fázi životního cyklu viru. Tato diplomová práce je zaměřena na studium minoritních proteinů Myšího polyomaviru (MPyV) a lidského polyomaviru BK (BKV). V rámci této práce byly připraveny čtyři králičí polyklonální protilátky proti minoritním proteinům virů MPyV nebo BKV. Dvě připravené protilátky jsou namířeny proti minoritním proteinům MPyV (α-MPyV VP2/3) nebo BKV viru (α-BKV VP2/3) a další dvě připravené protilátky rozeznávají společnou C-koncovou sekvenci minoritních proteinů VP2 a VP3 MPyV (α-MPyV C-termVP2/3) nebo BKV viru (α-BKV C-termVP2/3). V druhé části práce jsme se zaměřili na studium toxicity minoritních proteinů polyomaviru BKV při jejich samostatné produkci v savčích buňkách. Získaná data naznačují, že v porovnání s minoritními proteiny VP2 a VP3 viru MPyV, nevykazují minoritní proteiny BKV viru tak vysokou míru cytotoxicity. Třetí část práce je věnována studiu interakcí minoritních proteinů polyomavirů BKV a MPyV s buněčnými proteiny a mezi sebou navzájem. Pomocí připravených protilátek byly...

Even though polyomaviruses have been intensively studied for more than 60 years, the role of minor structural proteins VP2 and VP3 in some important steps of viral life cycle has still not been fully elucidated, explicitly their role in viral genome delivery to the cell nucleus and their involvement in late phases of viral life cycle. This diploma thesis focuses on the study of minor proteins of Mouse polyomavirus (MPyV) and Human polyomavirus BK (BKV). Four rabbit polyclonal antibodies against minor proteins of polyomaviruses MPyV or BKV have been prepared within this diploma thesis. Two of these prepared antibodies target minor proteins of MPyV (α-MPyV VP2/3) or BKV virus (α-BKV VP2/3), other two prepared antibodies recognize C-terminal sequence common to minor proteins VP2 and VP3 of MPyV (α-MPyV C-termVP2/3) or BKV virus (α-BKV C-termVP2/3). In the second part of this diploma thesis we aimed to study toxicity of BKV virus minor proteins during individual production in mammalian cells. Obtained results suggest that minor proteins of BKV virus might not exhibit as high levels of cytotoxicity as minor proteins of MPyV virus. Third part of this diploma thesis is devoted to investigation of interactions of BKV and MPyV minor proteins with cellular proteins and within one another respectively....