Optimalizace metody vedoucí k hodnocení citlivosti biofilm formujících stafylokoků vůči kandidátním antimikrobním látkám

Abstract

Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd Studijní program: Zdravotnická bioanalytika Autor: Bc. Adéla Diepoltová Školitel: RNDr. Klára Konečná, Ph.D. Název diplomové práce: Optimalizace metody vedoucí k hodnocení citlivosti biofilm formujících stafylokoků vůči kandidátním antimikrobním látkám Cíl práce: Cílem práce bylo optimalizovat postup in vitro formace stafylokokových biofilmů na kolíčcích a v jamkách šestadevadesáti jamkové mikrotitrační destičky dle vzoru komerčně dostupného systému The Calgary Biofilm Device. V Experimentu 1 bylo třeba optimalizovat podmínky inkubace (vlivu média, módu inkubace, optické denzity počáteční bakteriální suspenze a vlivu místa formace biofilmu v rámci systému) vedoucí k maximálnímu nárustu biofilmové masy dvou stafylokokových kmenů s neznámým biofilmovým fenotypem a u jednoho kmene definovaného jako silný pruducent biofilmu. Nejvhodnější kombinace podmínek byla využita při inkubaci klinických izolátů v Experimentu 2. Sbírkové klinické izoláty bylo cílem rozdělit do kategorií dle schopnosti formace biofilmu. Práce by měla navrhovat postup in vitro formace maximálně objemných stafylokokových biofilmů vhodných k hodnocení citlivosti vůči kandidátním antimikrobním látkám. Metody: Hodnocení schopnosti...

Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Study program: Healthcare Bioanalytics Author: Bc. Adéla Diepoltová Supervisor: RNDr. Klára Konečná, Ph.D. Title of thesis: Optimization of the method for sensitivity evaluation of biofilm- forming staphylococci against candidate antimicrobial compounds Background: The aim of this thesis was to optimize approach for in vitro formation of staphylococcal biofilms on the pegs and on the wells of the 96-well panel as an analogous approach to commercially available Calgary Biofilm Device system. The aim of the Experiment 1 was to evaluate incubation conditions (such as impact of a growth medium, incubation mode, optical density of the starting bacterial inoculum and type of surface) leading to maximal biofilm formation of two biofilm producer strains with unknown biofilm phenotype and one staphylococcal strain known as strong biofilm producer. The most advisable conditions were used in incubation process of Experiment 2. This work should propose the approach leading to in vitro formation of the most voluminous staphylococcal biofilms exploitable for candidate drug antimicrobial activity testing. Methods: Spectrophotometric measurement of the crystal violet colour extracted from wells with fixed and stained Staphylococci to evaluate the ability to...